Галк писал(а):Как подобрать, какое количество пара нужно выставить для конкретного растительного образца, когда проводишь дистилляцию на аппарате Velp?
Для начала давайте я чуть-чуть расскажу о том, как работает автоматизированный метод Кьельдаля и в чем разница между автоматизированными методами и ручным методом.
Основная идея, заложенная в любую автоматизацию - работа в максимально стандартных условиях. Вы берете более-менее стандартное количество образца, вы берете стандартное количество реактива, нагреваете стандартное время и в результате получаете ускорение и упрощение анализа, плюс большую воспроизводимость результатов. Но автоматизация приводит к тому, что вы не имеете возможности (как правило) контролировать происходящий процесс со всех возможных точек зрения. Если в ручном методе вы видите, что образец не сгорел до конца и надо смыть его кислотой со стенок - вы смываете, а после сжигания, добавляете щелочь в том объеме, чтоб нейтрализовать всю кислоту, которая попала в пробу. Смывали кислотой - добавляете больше щелочи, не смывали - меньше, а изменение цвета раствора или выпадение осадка показывает, что все реакция нейтрализации прошла полностью.
В автоматизированном варианте при работе на оборудовании типа DK и UDK или на любом другом - отследить полностью ли нетрализовался образец или полностью ли перегнался азот достаточно проблематично. Поэтому единственный выход в данном случае - максимально стандартизировать условия проведения анализа. Вы должны нормировать количества образца и от этого значения плясать как от печки:
- стандартное количество образца (не в грамма, а в количестве азота, больше азота (белка) в образце - меньше масса навески.
- стандартное количество кислоты для сжигания
- стандартное количество щелочи для нейтрализации кислоты
- стандартное время перегонки образца с получением определенного количества дистиллята (если азота будет меньше - не страшно, главное, его не должно быть больше).
Таким образом подбирайте навеску по вашему вкусу - порядка 50-100 мг белка на навеску. Если это молотое зерно с количеством белка 12%, то масса навески будет 500-600 мг, если это богатое белком мясо (35% белка на вяленое мясо) - навеска меньше, порядка 300 мг. На данную навеску берете стандартные 7 мл кислоты и порядка 50 мл щелочи. Отгонять аммиак до получения 200-225 мл дистиллята. У вас все должно перегнаться. В этих стандартных условиях (по количеству азота на пробу) и необходимо работать. Если вы добавляете кислоту или берете навеску с большим содержанием азота - создайте на приборе другой метод, который позволит проводить анализ именно таких образцов, но это, на мой взгляд, не так и удобно.
Для проверки работы всей системы необходимо взять несколько навесок, разной массы, и посмотреть, какое количество белка в образце у вас будет определяться. При одинаковом холостом опыте и полностью сгоревшей навеске вы должны получить одинаковый результат не зависимо от массы навески, что для 200 мг образца, что для 500 мг образца, что для 1 грамма образца. НО!!! Если для большой навески содержание белка (азота) окажется меньше - то это будет означать, что вы достигли предела по скорости перегонки азота с паром - большое количество азота просто не успевает перегоняться. Такую же проверку, без шага сжигания, можно сделать и с помощью нескольких навесок сухих солей аммония - сульфата или хлорида. Растворит их в небольшом количестве воды, установите пробирку в прибор, включите подачу щелочи и цикл дистилляции. Определив, сколько азота у вас перегоняется вместе с 200 мл дистиллята вы получите верхний предел по массе азота в образце (ну и, соответственно, массе самого образца).